更新時間:2024-07-05
黃曲霉毒素B1檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料等樣本中的黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | YZ-R588 |
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規(guī)格 | 96T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研使用 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
黃曲霉毒素B1檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說明書:
1、原理及用途:
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料等樣本中的黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的黃曲霉毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉毒素B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素B1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中黃曲霉毒素B1的殘留量。
2、黃曲霉毒素B1檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo):
2.1、試劑盒靈敏度:0.03ppb(ng/ml)
2.2、反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3、檢測下限:
谷物…………………………………………0.15ppb
玉米皮、麩皮等吸水性強樣本……………0.6ppb
食用油、花生油……………………………0.6ppb
醬類、餅干、糕點等食品或調(diào)料…………0.6ppb
啤酒…………………………………………0.3ppb
葡萄酒、醬油、醋…………………………0.15ppb
茶葉…………………………………………0.2ppb
麥類…………………………………………1.2ppb
2.4、交叉反應(yīng)率:
黃曲霉毒素B1…………………………100%
2.5、樣本回收率:
谷物…………………………………85±15%
花生油………………………………82±15%
食用油………………………………85±15%
醬類、餅干、糕點等食品或調(diào)料…83±15%
啤酒…………………………………84±15%
葡萄酒、醬油、醋…………………87±15%
茶葉、麥類…………………………75±15%
3、試劑盒組成:
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液:100ppb…………………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說明書………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個
4、需要的器材和試劑:
4.1、儀器:酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2、微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3、試劑:甲醇、正己烷、3氯甲烷
5、樣本前處理:
5.1、樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果
5.2、配液:
配液1:樣本提取液
70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3
配液2:工作洗滌液
將20×濃縮洗滌液20倍稀釋(1份20×濃縮洗滌液加19份去離子水)
配液3:樣本復(fù)溶液
35%甲醇,即V甲醇:V去離子水=3.5:6.5
5.3、樣本前處理步驟:
5.3.1、谷物處理方法:
1)稱取2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加5ml樣本提取液(配液1),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻
3)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):5檢測下限:0.15ppb
5.3.2、玉米皮、麥麩等吸水性強樣本處理方法:
1)稱取2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加20ml樣本提取液(配液1),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻;(對于毒素含量的樣本可用樣本復(fù)溶液(配液3)稀釋后再測。比如取2)中的混合液0.1ml加0.9ml樣本復(fù)溶液(配液3)混勻,最終樣本稀釋倍數(shù)為200,檢測下限為6ppb。)
3)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):20檢測下限:0.6ppb
注:由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài),取樣時需多點取樣充分混勻后再取2g進(jìn)行試驗
5.3.3、食用油、花生油處理方法:
1)稱取2ml樣本于50ml離心管中,加8ml正己烷和10ml樣本提取液(配液1),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)去除上層液體,取0.5ml下層液體加入0.5ml去離子水,混勻,再取混勻液體0.5ml加入0.5ml樣本復(fù)溶液(配液3),振蕩30s
3)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):20檢測下限:0.6ppb
5.3.4、醬類、餅干、糕點等食品或調(diào)料處理方法:
1)稱取1g±0.05g粉碎樣本至15ml離心管中,加10ml甲醇,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘
2)取2ml上清至15ml離心管中,于50℃-60℃下氮氣或空氣吹干
3)加入2ml去離子水,振蕩30s,再加入6ml3氯甲烷,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘
4)取下層3氯甲烷液1.5ml至10ml離心管,于50℃-60℃下氮氣或空氣吹干
5)加入0.5ml正己烷,振蕩30s,再加入1ml樣本復(fù)溶液(配液3),振蕩1分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘
6)去除上層有機物相,取下層清液50µl分析
樣本稀釋倍數(shù):20倍檢測下限:0.6ppb
5.3.5、啤酒處理方法:
1)將啤酒充分?jǐn)嚢?去除二氧化碳),取2ml啤酒樣本,加入1ml蒸餾水,再加入7ml甲醇,振蕩5分鐘
2)取混勻后的樣本液0.5ml加入0.5ml去離子水,混勻
3)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):10檢測下限:0.3ppb
5.3.6、葡萄酒、醬油、醋處理方法:
1)取2ml樣本,加入2ml蒸餾水,再加入10ml3氯甲烷,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)取下層液體1ml于50-60℃下氮氣或空氣下吹干
3)加入0.5ml樣本提取液(配液1)充分溶解干燥物,再加入0.5ml去離子水,混勻
4)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):5檢測下限:0.15ppb
5.3.7、茶葉處理方法:
1)稱取2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加4ml甲醇溶液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)取0.3ml上清,加入0.6ml去離子水,混勻
3)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):6檢測下限:0.2ppb
5.3.8、麥類處理方法:
1)稱取1g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加入2ml樣本提取液(配液1),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)取0.2ml上清,加入0.2ml去離子水,振蕩30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘
3)取離心后的樣本液0.1ml加入0.9ml樣本復(fù)溶液(配液3),混勻
4)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):40檢測下限:1.2ppb
6、酶聯(lián)免疫試驗步驟:
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃
6.1、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置
6.2、加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘
6.3、洗滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350µl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)
6.4、顯色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時間)
6.5、終止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)
6.6、測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成
7、結(jié)果分析:
7.1、百分吸光率的計算:
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)=A×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算:
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析(歡迎來電索取)
8、注意事項:
8.1、室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低
8.2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作
8.3、混合要均勻,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性
8.4、在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射
8.5、不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑
8.6、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)
8.7、反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚
9、貯藏及保存期:
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保質(zhì)期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。